7-AAD染色液為Annexin V鑒定凋亡和壞死細(xì)胞輔助試劑。
7-AAD可與雙鏈DNA特異性結(jié)合，并產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光，正常情況下無法透過細(xì)胞膜。由于凋亡晚期或壞死細(xì)胞膜喪失完整性，7-AAD可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)對DNA進(jìn)行染色，與Annexin V搭配使用，可區(qū)分處于不同凋亡時期的細(xì)胞。
本試劑搭配Annexin V-APC檢測誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡效果如下圖所示：

實(shí)驗(yàn)操作指南步驟：
1. 細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)，300g離心5min，棄上清，收集細(xì)胞，PBS洗滌一次，輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。
注：本品僅在懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中驗(yàn)證，良好的細(xì)胞狀態(tài)是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。貼壁生長的細(xì)胞用于凋亡檢測時，可能會因?yàn)橄⒋荡虻忍幚韺?dǎo)致細(xì)胞的壞死或凋亡，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能存在不可控的影響，請謹(jǐn)慎處理。
2. 取1-5×10^5重懸的細(xì)胞，300g離心5min，棄上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次，離心后棄上清，加入500μL稀釋的1×Annexin V Binding Buffer工作液重懸細(xì)胞。
3. 細(xì)胞懸液中加入5μL的Annexin V-熒光染色液和5μL的7-AAD染色液。
4. 輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15-20min。
5. 反應(yīng)完成后立即上機(jī)檢測。如不能及時檢測，請于冰上避光靜置并于1小時內(nèi)完成檢測。

保存條件：
-20℃可保存1年；7-AAD染色液需要避光保存，建議將7-AAD染色液適當(dāng)分裝后-20℃保存。

注意事項(xiàng)：
1. 為獲得的使用效果，請?jiān)?-6個月內(nèi)使用；
2. 染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加；
3. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，操作和存放過程中注意避光保存；
4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

(本試劑產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療)